細(xì)胞培養(yǎng)的本質(zhì)是細(xì)胞克隆技術(shù)。原理就是盡可能給細(xì)胞提供類似于體內(nèi)的環(huán)境，在無(wú)菌條件下，給予適當(dāng)?shù)臏囟群退釅A度以及細(xì)胞生長(zhǎng)繁殖所必要的營(yíng)養(yǎng)條件，使其能在體外維持正常的生長(zhǎng)繁殖，并保持其結(jié)構(gòu)和功能的技術(shù)。

細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)的應(yīng)用十分廣泛，基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)研究，抗體制備，新藥篩選，基因工程等等都需要用到細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)。

貼壁細(xì)胞如何高效傳代？

貼壁生長(zhǎng)的細(xì)胞，在培養(yǎng)瓶或者培養(yǎng)皿長(zhǎng)至單層鋪滿的狀態(tài)后后，空間已基本上飽和，細(xì)胞生長(zhǎng)、增殖受阻，為使其繼續(xù)擴(kuò)增或生長(zhǎng)，需要進(jìn)行傳代（再培養(yǎng)）處理。同時(shí)，傳代培養(yǎng)也可用于細(xì)胞種的保存。不僅如此，各種細(xì)胞實(shí)驗(yàn)也是以高效的細(xì)胞傳代為基礎(chǔ)的。

懸浮型細(xì)胞直接分瓶就可以，而貼壁細(xì)胞則需經(jīng)消化等處理后才能分瓶。

一般使用胰蛋白酶，將貼壁細(xì)胞消化成成單個(gè)細(xì)胞，也可加入EDTA提高消化能力（EDTA 是一種二價(jià)離子的螯合劑，能抑制細(xì)胞膜上的Ca2+和Mg2+）。

常用的細(xì)胞消化液一般含有0.25%(w/v)的胰酶和0.03% (w/v) EDTA。

實(shí)驗(yàn)時(shí)，先用吸去細(xì)胞培養(yǎng)上清，用PBS清洗細(xì)胞，棄掉洗滌液，重新加入少量的胰酶-EDTA 消化液(根據(jù)培養(yǎng)皿的大小不同，一般2-5ml消化液即可，以剛好鋪滿整個(gè)皿底為原則)，觀察細(xì)胞直到細(xì)胞變圓脫離瓶壁，此過(guò)程一般需要3-5分鐘，為了避免細(xì)胞成團(tuán)，消化細(xì)胞的過(guò)程中不要拍打細(xì)胞瓶。對(duì)于特別難消化的細(xì)胞，可以加入胰酶EDTA 消化液后把細(xì)胞置于37°C 促進(jìn)消化，細(xì)胞脫離瓶壁后，立刻加入含有血清的*培養(yǎng)基中止消化。

800-1000rpm，離心5分鐘，然后棄去中止用的培養(yǎng)基，加入適合的新的培養(yǎng)基輕輕混勻細(xì)胞，移入到新的培養(yǎng)瓶。傳代的比例視細(xì)胞類型而定。胰蛋白酶會(huì)對(duì)某些細(xì)胞的細(xì)胞膜產(chǎn)生損傷，對(duì)于這種類型的細(xì)胞，可用細(xì)胞刮輕輕刮下細(xì)胞，加入適量的培養(yǎng)基，輕輕吹打混勻細(xì)胞，然后進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

WHO公布的《用動(dòng)物細(xì)胞體外培養(yǎng)生產(chǎn)生物制品規(guī)程》中的要求：

1、牛血清必須來(lái)自有文件證明無(wú)牛海綿狀腦病的牛群或國(guó)家，并應(yīng)具備適當(dāng)?shù)谋O(jiān)測(cè)系統(tǒng)。

2、有些國(guó)家還要求牛血清來(lái)自未用過(guò)反芻動(dòng)物蛋白飼料的牛群。

3、證明所用牛血清中不含對(duì)所生產(chǎn)疫苗病毒的抑制物。

4、血清要通過(guò)濾膜過(guò)濾除菌，保證無(wú)菌。

5、無(wú)細(xì)菌、霉菌、支原體和病毒的污染，有些國(guó)家要求無(wú)細(xì)菌噬菌體污染。

6、對(duì)細(xì)胞有良好的支持繁殖作用。

我國(guó)對(duì)牛血清的質(zhì)量中提出比較嚴(yán)格的標(biāo)準(zhǔn)要求：

包括蛋白質(zhì)含量，細(xì)菌、真菌、支原體、牛病毒、大腸桿菌噬菌體、細(xì)菌內(nèi)毒素，支持細(xì)胞增殖檢查。一款來(lái)自澳洲的Ausbian®胎牛血清在市場(chǎng)上頗受歡迎。它具有精選內(nèi)毒素極低、產(chǎn)量充足的血清批次，滿足干細(xì)胞、基因敲除、原代培養(yǎng)、細(xì)胞典藏、長(zhǎng)期傳代等各類細(xì)胞的培養(yǎng)要求；澳洲血源，完整的檢測(cè)報(bào)告及滅病毒服務(wù)，為各類臨床相關(guān)項(xiàng)目的申報(bào)提供完整支持等特點(diǎn)。